Андрологическая лаборатория для ЭКО лечения

Андрологическая лаборатория

 

Анализ спермы

 

Современные клиники с международной аккредитацией располагают современным оборудованием для детального изучения и оценки пробы спермы и подготовки ее для опладотворения. 

Пример комнаты для сдачи спермы в Турции

 

Анализ спермы - это тест, который рекомендуется в первую очередь парам которые планируют ребенка. 

Анализ спермы (спермиограмма ) очень важная часть исследования бесплодия, так как неопытность специалиста, исследующего сперму, может изменить весь подход к лечению. 

 

С помощью этого теста оцениваются количество сперматозоидов, подвижность и форма спермотозоида в первичной сперме. Анализ спермы проводится после 3-5 дней сексуального воздержания. 

Этот период очень важен для оценки спермы. Если время воздержания увеличивается, подвижность и жизнеспособность сперматозоидов снижается, вероятность повреждения ДНК сперматозоидов увеличивается. 

Отсутствие абстиненции приводит к снижению количества сперматозоидов и увеличению подвижности сперматозоидов. Поскольку на выработку спермы влияют многие факторы, такие как курение, алкоголь, наркотики и инфекции, анализ аномальных проб следует повторять два или три раза с интервалом в один месяц. Если при анализе спермы обнаружат аномалии, мужчину следует дополнительно обследовать с точки зрения физических и гормональных аспектов.

 

Сперма возобнавляется каждые 2-3 месяца. другими словами, сперматозоиды секретируются через 2-3 месяца. Перед тем, как дать образец спермы, необходимо учесть следующие важные моменты:
Мочевой пузырь должен быть полностью опорожнен непосредственно перед сдачей образца спермы.
Руки и пенис должны быть полностью высушены после мытья с мылом и большим количеством воды.
Контейнеры для спермы являются стерильными.


Любая смазка (мыло, масло, вазелин, слюна и т. Д.) Не должна использоваться.
Важно, чтобы весь образец спермы был собран в контейнер..
Если пациенту трудно мастурбировать, разрешается использовать нетоксичную смазку, предоставленную клиникой.

 

 Нормальные значения спермы (в соответствии с критериями ВОЗ)

 

  • Объем  - 2,0 мл или более
  • рН   -  7.2-8.0
  • Количество сперматозоидов  -  20 миллионов или более на миллилитр
  • Подвижность сперматозоидов - В течение 60 минут после эякуляции количество быстрой, подвижной и медленной подвижной спермы вперед должно быть более 50%, или количество быстрой подвижной спермы вперед должно быть более 25%.
  • Нормальная морфологическая структура (форма) 4% (строгие критерии Крюгера) или больше

 

  • Виталит (Жизнеспособность) - 75% или больше

 

  • лейкоциты - 1x106

 

Диагнозы, по результатам анализа спермы, приведены ниже:

  • Нормоспермия Количество сперматозоидов, подвижность и форма в норме
  • Олигоспермия Количество сперматозоидов ниже нормы
  • Астеноспермия Подвижность сперматозоидов ниже нормы
  • Тератоспермия Нормальная форма спермы ниже, чем нормальные значения
  • Олигоастеноспермия Количество и подвижность сперматозоидов ниже нормы
  • Астено-тератоспермия Подвижность и форма спермы ниже нормальных значений
  • Олиго-астено-тератоспермия Количество, подвижность и форма спермы ниже нормальных значений
  • Тяжелая олиго-астено-тератоспермия Количество сперматозоидов менее 5 млн / мл, низкая подвижность сперматозоидов и аномальная форма
  • Азоспермия Нет спермы в сперме
  • Виртуальная азоспермия (криптозооспермия) В некоторых образцах индивидуума обнаруживается очень мало (<100 бин / мл) сперматозоидов, в то время как в некоторых образцах сперматозоиды не видны.
  • Общая неподвижная сперма Все сперматозоиды в сперме неподвижны

МОРФОЛОГИЯ Спермы (ФОРМА)

Одним из важнейших показателей качества спермы является ее форма. 

Золотой стандарт  морфологии спермы выполняется в соответствии с критериями Крюгера.

 Способность к оплодотворению образца спермы определяется путем изучения формы (морфологии) характеристик спермы после специального окрашивания (Spermac).  Краситель окрашивает ядро ​​спермы в красный цвет, акросому, шею и хвост в зеленый цвет. В сперме более 4% сперматозоидов должны иметь нормальную форму. Если количество сперматозоидов нормальной формы составляет менее 4%, это может отрицательно повлиять на успешность лечения ЭКО. При анализе спермы оценивается не менее 100 сперматозоидов. 

 Среди параметров, оцениваемых при анализе спермы, подвижность сперматозоидов и морфология сперматозоидов предоставляют наиболее важную информацию о потенциале оплодотворения сперматозоидов. 

 

 Существует два распространенных метода оценки морфологии сперматозоидов; Критерии ВОЗ и строгие критерии Крюгера.

 

 При обследовании, проведенном в соответствии с этими критериями, аномалия оценивается отдельно по 38 различным параметрам. Состояние сперматозоидов с нормальной морфологией ниже 4% определяется как тератозооспермия. 

 

 Если в классификации согласно нормальным формам ниже 4%, рассматривается субраспределение аномалий. Считается важным видеть более 80% серьезных аномалий сперматозоидов в нашем центре в соответствии с критериями Крюгера. Важно объяснить эту ситуацию при информировании пары в соответствии с результатом анализа спермы.

 

Нормальная сперма

Сперматозоид состоит из трех частей: головы, средней части и хвоста. Голова содержит генетический материал. Средняя часть обеспечивает энергию, необходимую для движения спермы, а хвостовая часть обеспечивает движение спермы (подвижность). При оценке морфологии длина головки нормального сперматозоида должна составлять от 4 до 5 мкм, ширина головки от 2,5 до 3,5 мкм, соотношение длины и ширины головы должно составлять 1,50-1,75. Средняя часть должна быть соединена с цилиндром толщиной 0,5-1 мкм, длиной 7-8 мкм и в осевом направлении с головкой. Хвост немного тоньше средней части, не скручен, имеет равномерную форму и длину около 40-50 мкм.

 

 

Нормальное морфологическое изображение спермотозоида

Тяжелые морфологические дефекты сперматозоидов

Приблизительно 15% всех пар во всем мире имеют проблемы первичного или вторичного бесплодия.

 

 Современные методы подготовки сперматозоидов, используемые в ЭКО, внутрицитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИКСИ) и внутрицитоплазматическая морфологически отобранная инъекция сперматозоидов (ИМСИ),  очень эффективны и значительно решают проблему мужского бесплодия.

 

Тяжелые с морфологическими аномалиями спермотозоиды отрицательно влияют на оплодотворяющую способность спермы. 

 

Наиболее важными аномалиями являются большая головка сперматозоида  ( мегало, макроцефалия), круглая головка (глобозооспермия) и аномалия хвоста, а также синдром  Tail-stump, наблюдаемые с аномалией в области головки спермы. 

 

Макроцефалия, (Головка Мегало):

Это когда сперматозоиды больше нормальных размеров, в основном нерегулярные и многоядерные. 

 Часто выделяются в виде неправильных форм с многочисленными головками и хвостами (полиплоидные, макроядерные). 

Хромосомное исследование сперматозоидов с большой головкой показывает, что хромосомное содержание сперматозоидов этого типа выше, чем должно быть из-за дефектов расщепления. Содержание хромосом, показанное как 1N в нормальной сперме, может быть экспоненциально 2N, 3N (полиплоидия) или даже больше в сперматозоидах с большой головой. Кроме того, аномальные численные изменения (высокая анеуплоидия) обнаруживаются в одной или нескольких хромосомах этих сперматозоидов.

Недавние исследования показывают, что в случаях сперматозоидов с высокой аномалией в эякуляте, даже если сперматозоиды с нормальной структурой головки , они, скорее всего, содержат хромосомные аномалии. Причина этого заключается в том, что один из генов, которые функционируют во время образования спермы, является дефектным, то есть генетической проблемой. В образцах, где присутствует эта аномалия, часто встречаются сперматозоиды с булавочной головкой.

 

Синдром большой головки  сперматозоидов,  был впервые описан в 1977 году, определяется наличием сперматозоидов с очень большими головаками и множественными хвостами в эякуляте.  Синдром, известный как макроцефалия встречается менее чем в 1% случаев с тяжелым мужским бесплодием.

 

В тех случаях, когда эта аномалия является преобладающей, из-за низкого количества сперматозоидов, подвижности и жизнеспособности, может возникнуть необходимость хирургического метода (забор сперматозоидов  из яичек, TESE).

 

Другим важным подходом при аномалиях спермы  является  преимплантационная генетическая диагностика (ПГТ),  эмбрионов, что дает  возможность подсадки нормальных эмбрионов как хромосомно, так и генетически будущей маме. 

 

Более высокие показатели беременности достигнуты путем переноса нормальных хромосомных эмбрионов после ПГТ беременным женщинам.

 

В случаях с этим синдромом очень важно выбрать небольшое количество нормальных или относительно нормальных сперматозоидов. В отличие от классического метода, отбор спермы с очень большим увеличением называется методом IMSI. Сперма, которая обычно отбирается с увеличением 200-400, увеличивается в 8050 раз что дает возможность определить наличие вакуолей, которые могут привести к повреждению ДНК сперматозоидов, и можно выбрать сперму, которая не несет этих нарушений.

 

В случаях, когда преобладают макроцефалия, отбор сперматозоидов и микроинъекция являются наиболее полезным методом с помощью метода IMSI. Скрининг эмбрионов с хромосомными аномалиями методом PGT увеличивает вероятность здоровой беременности.

 

Round Head (Круглая Голова, Глобозооспермия)

Сперматозоиды с круглой головкой образуются в результате разрушения структуры головки, которая обычно овальная и содержит акросомную шапочку, из-за отсутствия акросомной части и проблем со скелетной структурой сперматозоидов. Акросома - это структура, которая позволяет сперматозоидам связываться со слоем опоясывающего лишая, окружающим яйцеклетку, и пропускает этот слой через ферменты плавления, содержащиеся в ней, чтобы попасть в яйцеклетку. Следовательно, при ее отсутствии сперма не может оплодотворить яйцеклетку нормальным способом. 

Эта проблема решается с помощью метода ИКСИ, но из-за сопутствующих проблем в структуре ДНК сперматозоидов, способность к оплодотворению довольно низкая.

Нити ДНК (хроматин) зрелой спермы свободно упакованы внутри ядра (зрелой ДНК). Однако, поскольку эта структура плотно упакована (незрелая ДНК) в сперматозоиды с круглой головкой, нити ДНК сперматозоидов не могут быть вскрыты в яйцеклетке, и в результате оплодотворение не может произойти. В этих формах также предполагается, что часть спермы, называемая центросомой, которая образует структуры (нити веретена), ответственные за движение хромосом во время оплодотворения, следовательно, повреждена и, следовательно, оплодотворение не может произойти. Многие исследования показали, что у этих сперматозоидов есть большие переломы (фрагментация) в их ДНК.

 

Описаны два типа глобозооспермии. При I типе почти вся сперма состоит из сперматозоидов с круглой головкой и акросомы отсутствует. Во II типе с конусообразной головкой можно увидеть сперматозоиды с низкой частотой акрозом, а также отсутствие движения.

 

Хотя гены, ответственные за это расстройство, не были полностью идентифицированы, существуют исследования, показывающие, что они генетически транзитивны. Повышенные коэффициенты анеуплоидии (численная хромосомная аномалия) были обнаружены при исследованиях сперматозоидов FISH, проведенных на круглоголовых сперматозоидах. В целом, в случаях глобозооспермии наблюдается низкий уровень оплодотворения, плохое развитие эмбрионов, низкий уровень беременности и увеличение случаев потери беременности. Редко наблюдаются случаи, когда нет оплодотворения.

 

В этих случаях использование метода IMSI (микроинъекция отобранных сперматозоидов с большим увеличением) и использование акросомных сперматозоидов для микроинъекции увеличивает шансы на успех.

 

Серьезный дефект хвоста (дисплазия фиброзной оболочки)

Дефект культи хвоста является наиболее серьезной аномалией хвоста спермотазоида с коротким, тупым и утолщенным хвостом, вызванным дефектами или дефектами в белковых структурах, которые составляют хвост спермотазоида. Утолщение в хвосте происходит из-за неконтролируемого развития волокнистой структуры, окружающей хвост, и кончик хвоста является распространенным заболеванием во всех подтипах сперматозоидов. Хотя есть исследования, показывающие гены, связанные с некоторыми типами этой аномалии, которая считается генетически транзитивной, ответственные гены не могут быть определены четко.

 

Хотя жизнеспособность сперматозоидов в основном высокая, подвижность очень низкая из-за нарушения структуры хвоста сперматозоидов, и часто встречаются полностью неподвижные сператозоиды. Мобильность является наиболее важным параметром, который показывает жизнеспособность сперматозоидов, и поэтому выбор живых сперматозоидов для ИКСИ становится в этих случаях затруднительным. Следовательно, в случаях, когда жизнеспособность очень низкая, может быть предпочтительным использование сперматозоидов яичка с более высокой жизнеспособностью (80–90%). 

 

С увеличением в 8050 раз                                                                                Окрашены сперматозоидной краской

Оценка морфологии подвижных сперматозоидов (MSOME = исследование морфологии подвижных сперматозоидов)

 

Метод MSOME (исследование морфологии подвижных сперматозоидов) представляет собой анализ морфологии сперматозоидов, выполненный с помощью оборудованных микроскопов, которые могут увеличивать движущиеся сперматозоиды в 6000-8050 раз.

 

Оценка морфологии сперматозоидов играет важную роль в определении мужского репродуктивного потенциала и стратегии лечения. Многие научные исследования, проведенные к настоящему времени, показали, что морфология сперматозоидов оказывает важное влияние на оплодотворение, развитие эмбрионов и исходы беременности. Первым этапом диагностики мужского бесплодия является оценка параметров спермы (спермиограмма). В тех случаях, когда нормальный уровень сперматозоидов является низким в соответствии с результатом спермиограммы, в случаях бесплодия из-за тяжелого мужского фактора сперматозоиды оцениваются с помощью методики MSOME (морфология органеллы сперматозоидов сперматозоидов), а также в дополнение к спермиограмме при мужском бесплодии при рецидивирующей недостаточности ЭКО и необъяснимом бесплодии, исследуется мужская сперма.

Помимо основных аномалий спермы, можно различить структуры аномалий и вакуоли (пузырьки, заполненные жидкостью) в головке сперматозоида по методике MSOME. 

 

Вакуоли в ядре, содержащие генетический материал в головке сперматозоида, дают понять, что может быть повреждение структуры ДНК. Исследования показали, что скорость повреждения ДНК выше у сперматозоидов, содержащих вакуоли, чем у сперматозоидов без вакуолей. Повреждения в структуре ДНК сперматозоидов, нарушение осеменения, остановка развития эмбрионов могут привести к плохому и / или медленному развитию эмбрионов и, таким образом, повлиять на вероятность беременности.

 

Наиболее важным отличием между техникой MSOME и классической оценкой морфологии сперматозоидов является метод подготовки сперматозоидов. Для оценки классической морфологии все сперматозоиды фиксируются на предметном стекле микроскопа и окрашиваются специальными красителями. Поэтому при оценке подвижная и неподвижная сперма оцениваются вместе. В методике MSOME оценивают подвижную сперму, полученную после приготовления спермы . Таким образом, можно получить информацию о качестве сперматозоидов, которые могут быть выбраны для микроинъекции.

 

При оценке морфологии спермы с помощью метода MSOME проводится четырехступенчатая оценка качества в соответствии со структурой головы, наличием вакуолей в голове и размером вакуолей в сперматозоидах с нормальной структурой шеи и хвоста. Согласно этой оценке, в то время как сперматозоиды с нормальной морфологией и без вакуолей в голове определяются как 1-е качество, качество сперматозоидов снижается из-за увеличения количества и размера вакуолей. Сперматозоиды с аномальной структурой головы и содержащие вакуоли определяются как 4-е качество.

 

Анализ спермы с помощью электронной микроскопии

Если определенные деформации, наблюдаемые после исследования формы спермы, превышают нормальные значения, этот тест выполняется только для диагностических целей.

Некоторые из этих отклонений:

  • Глобозоаспермия (круглая голова без
  • акросомы ) 
  • Мегалоголовый (большая голова ) Булавочная головка
  • (точечная головка)
  • Хвостовой пень
  • Сегментарная митохондриальная аплазия (регионарное отсутствие митохондрий)
  • Чрезвычайный дефект Dag
  • Множественное расстройство головки и хвоста
     

Иммунологические тесты, для исследования спермы

Агглютинация (кластеризация), наблюдаемая в образце спермы, часто связана с наличием антиспермальных антител. Антитела против спермы оседают на разных участках поверхности сперматозоидов и отрицательно влияют на подвижность сперматозоидов в матке. Иммунологические факторы существуют в 8% случаев бесплодия. Предполагается, что образцы, содержащие агглютинацию, связаны с бесплодием, которое невозможно объяснить.

Особенно, если считается, что причиной бесплодия являются иммунологические отколонения .  Тест применяется в тех случаях, когда при анализе спермы наблюдается агглютинация (связывание сперматозоидов друг с другом в области головы, шеи и хвоста).

 

Тест Immunobead

Immunobead проводится для выявления иммуноглобулинов в сперме. При прямом тесте на иммунный шарик подвижную сперму смешивают с суспензией, поэтому, если на сперматозоиде присутствуют антитела, эти шарики соединяются со спермой.

 

SPERM-MAR Тест

SpermMar (смешанный тест реакции агглютинации) используется для обнаружения антиспермальных антител. С помощью этого теста антитела IgG и IgA обнаруживаются в сперме. Тест состоит из покрытых латексом иммуноглобулинов. Частицы латекса прикрепляются к различным частям движущейся спермы (голова, середина или хвост) и могут быть легко обнаружены с помощью светового микроскопа. Подвижные сперматозоиды, которые наблюдаются, отмечены в процентах путем указания точек соединения.

 

Взаимодействие между движущейся спермой и латексной частицей указывает на присутствие антиспермальных антител. Значения от 15 до 39% указывают на подозрение на бесплодие, значения выше 40% указывают на наличие серьезной иммунологической проблемы.

Оценка жизнеспособности спермы

 

Для этого в Андрологической лаборатории проводится два теста:

Эозин-Y Тест:

Тест проводится как в лаборатории анализа спермы, так и в лаборатории андрологии.

 

 

 Тест на гипоосмотическое набухание (HOS) :

 

Этот тест проводится в тех случаях, когда в сперме нет подвижных сперматозоидов. В дополнение к его диагностическому использованию, сперматозоиды, обнаруженные подвижным, могут использоваться для микроинъекции. 

Идентификация других клеток, отличных от спермы в образце спермы

 

Идентификация лейкоцитов

Нормальная сперма не должна содержать более 1 миллиона лейкоцитов на миллилитр. Наличие в сперме более нормальных лейкоцитов (лейкоспермия) свидетельствует о наличии инфекции в репродуктивных органах. В образцах спермы, в которых количество лейкоцитов выше нормы, значения сперматозоидов оказываются отрицательными. Присутствие лейкоцитов, видимых в микроскопе во время анализа спермы в нашем центре, подтверждается готовыми наборами растворов, разработанными для идентификации лейкоцитов.

 

Определение зародышевой незрелой клетки (нежелательной репродуктивной клетки)

Ожидается, что в образце спермы количество репродуктивных клеток, которые еще не завершили свое развитие, составит 5 миллионов или менее в миллилитрах. Особенно в случаях, когда количество сперматозоидов очень низкое или при азооспермии, оценка этих клеток важна для определения выробатки сперматозоидов.

Клетки идентифицируют с помощью набора тест-симплет, состоящего из окрашивания Брайана-Лейшмана.

 

Подготовка спермы эякулята для осеменения или вспомогательных репродуктивных методов

Подготовка спермы играет важную роль в повышении успеха в процессах IUI, IVF и ICSI. 

 

Микроорганизмы удаляются путем промывания спермы специальными жидкостями, содержащими антибиотики.
Очистка семенной плазмы и загрязненных веществ в сперме. Некоторая сперма в аномальной морфологии удаляется, с помощью системы градиента.
 

Методы подготовки спермы


Mini Gradient используется индивидуально или в комбинации.
 

1. Sperm washing

Этот метод является первым из методов подготовки спермы и используется во многих центрах.  Метод основан на принципе смешивания и центрифугирования питательной среды и спермы в определенных пропорциях. Хотя с помощью этого метода получают высокие концентрации сперматозоидов, клеточный дебрис и лейкоциты не могут быть удалены. Этот метод подготовки используется в сочетании с другими методиками в нашем центре, где подвижность сперматозоидов достаточна, а концентрация лейкоцитов низкая.

 

2. Swim-up 

Для применения метода должно существовать достаточное количество сперматозоидов, движущихся вперед. С помощью этого метода сперма готовится к вакцинации (ВМИ), ЭКО и микроинъекции (ИКСИ). Это метод помещения сперматозоидного моющего средства на образцы нормальной вязкости и высокой подвижности сперматозоидов, помещая их в несколько пробирок для центрифуги и плавающих на верхней фазе, ожидая на склоне 45 градусов.

 

Комбинация Sperm washing и swim-up 

 

Разжиженный образец спермы центрифугируют в конических пробирках путем смешивания со средством для промывки спермы в определенных пропорциях. Удаляя надосадочную часть сверху, ее можно использовать, добавляя сперматозоидную промывочную среду на нижнюю часть. Этот процесс можно повторить в соответствии с характеристиками спермы. После того, как процесс промывки завершен, к полученному осадку добавляют промывочную среду для сперматозоидов, и конические пробирки ждут в инкубаторе с 5% CO2 при 37 ° С в течение 45-60 минут с наклоном 45 градусов, и ожидается, что сперматозоиды всплывут в верхнюю фазу. В конце этого периода плавающие сперматозоиды забираются в другую пробирку для центрифуги и используются в приложениях IUI, IVF и ICSI.

 

3. метод градиента плотности

Используется для подготовки спермы к микроинъекции, для этой цели используются специальные растворы, которые отделяют сперму от других веществ. Он основан на том факте, что сперму помещают на суспензию, состоящую из частиц коллоидного диоксида кремния, образующих градиент, и центрифугируют так, что сперма с центробежной силой проходит к дну пробирки. Сперматозоиды, которые лучше всего двигаются и имеют правильную морфологию (форму), перемещаются на дно, так что самые подвижные сперматозоиды собираются на дне. Исследования показали, что свободные радикалы кислорода, которые могут быть выделены из них, уменьшаются из-за удаления незрелых клеток и лейкоцитов. 

 

4. Мини Градиент

Это метод, который позволяет получить сперму хорошего качества, которую можно использовать для микроинъекции из образца спермы с очень низким количеством и высокой деформацией. Этот метод в основном используется при подготовке сперматозоидов яичка.

 

Тесты для определения повреждения ДНК спермы

 

Что такое повреждение ДНК спермы?

 

Существует тесная связь между мужским бесплодием и генетической структурой сперматозоида .

В нормальных тестах спермы оцениваются количество сперматозоидов, уровень подвижности и формальный статус. Однако, даже если все эти значения являются достаточными для беременности обычным способом и вспомогательными репродуктивными методами (АРТ), в некоторых случаях беременность не может быть достигнута или встречается неудачная вспомогательная репродуктивная техника. В этих случаях может возникнуть необходимость оценить структуру ДНК сперматозоида. Дефект в структуре ДНК сперматозоидов не только предотвращает вероятность беременности, но также снижает вероятность оплодотворения при вспомогательных репродуктивных методах, а также заставляет зародыш подвергаться ряду возможных рисков.


В исследованиях , проведенных в пробиркеБыло показано, что вероятность оплодотворения в парах оплодотворения (ЭКО) уменьшается с 60% до 30%, если есть повреждение ДНК. 
По этой причине параметры анализа спермы важны при определении и лечении повреждения ДНК спермы, даже если это возможно.


Причина, по которой повреждение ДНК происходит в сперме, полностью не объяснена. Тем не менее, в различных исследованиях, аномальный клеточный метаболизм, окислительный стресс, инфекции мочевыводящих путей, половые инфекции, факторы окружающей среды, ионизирующее излучение, перекрут яичка (вены яичка вращаются вокруг себя), обструкции (окклюзионные причины), высокая температура, зоб, варикоцеле, Было показано, что такие причины, как ожирение, диабет, курение, возраст, загрязнение воздуха, могут повредить руки ДНК, нарушая сохранение целостности ДНК сперматозоидов.


Повреждение ДНК в сперматозоиде может происходить в три этапа в ходе производства, хранения и выведения сперматозоидов . Одним из них является ДНК спермы через протамины.
Другим защитным фактором является то, что тонкие каналы, называемые семенниковыми канальцами внутри яичка, где расположены сперматозоиды и показывают их развитие, являются замкнутой средой, и в этой среде только стволовые клетки спермы и сперматозоиды находятся на разных стадиях развития.
Другим защитным механизмом являются антиоксидантные вещества, предоставляемые опорными клетками, называемыми клетками Сертоли, которые также находятся в канальце семинара и играют роль в сперматогенезе. Эти антиоксидантные вещества состоят из различных ферментов (каталаза), витаминов (витамины А, С, Е) и белков (альбумин, трансферрин, церулоплазмин, лактоферрин).


В обычном анализе спермы, как упоминалось выше, рассматриваются только количество сперматозоидов, движение и формальная структура. Оценка повреждения ДНК спермы проводится специальными методами. Для этой цели разработаны разные тесты. Все эти тесты выполняются на образце спермы, полученном обычным способом; однако это выполняется с использованием различных инструментов оценки. Мы можем кратко суммировать эти тесты следующим образом:

 1. Определение структуры сперматозоида хроматина (SCSA); Это сделано с использованием функции изменения цвета акридина оранжевого, который является специальной краской. Если в клетках есть повреждения ДНК, которые обычно должны быть окрашены в оранжевый цвет, цвет становится зеленым и красным (рис. 1). 

 

                       Рисунок 1: Анализ повреждения ДНК сперматозоидов с определением структуры хроматина сперматозоидов (  SCSA). Оранжевые клетки в норме; зеленые клетки показывают поврежденную структуру ДНК.

 

2.  Одноэлементный гель-электрофорез (КОМЕТ); Он измеряет миграцию сперматозоидов с поврежденной ДНК в электрическом поле. Сперматозоиды помещаются в специальную среду и проводится электростимуляция. Клетки с неповрежденной структурой ДНК не двигаются; Сперматозоиды с поврежденной структурой ДНК движутся. Между тем за движущимися клетками появляется изображение, похожее на комету. Плотность хвоста указывает на степень повреждения 

 

3.  TUNEL (Терминальный дезоксинуклеотидилтрансфераз-опосредованный дезоксиуридин (TdT) трифосфат (dUTP) Nick End Label Assay); Переломы ДНК отмечены специальным методом окрашивания. В то время как нормальные клетки отображаются синим цветом; поврежденные клетки видны в зеленом цвете, а слегка поврежденные клетки видны в синем / зеленом цвете (рис. 3). Подсчитывается общая ячейка и указывается процент. Оценка проводится с помощью иммунофлуоресцентного микроскопа или флюорометрии.

 

 4. Тест на отделение сперматозоида от хроматина (Halo Test = SCD); Он основан на том принципе, что сперматозоиды, содержащие фрагментированную ДНК, не могут образовывать характерный ореол вокруг при контакте с кислотой. После того, как сперматозоиды, помещенные в кислотосодержащую среду, подвергаются ряду процессов, проверяется, образовалось ли кольцо вокруг клетки. Если эта структура не наблюдается, ДНК спермы считается поврежденной .

 5.  Акридиновый апельсиновый тест; Сперматозоиды, окрашенные акридиновым оранжевым, помещают в кислую среду. Обычно, если ячейки, окрашенные в зеленый цвет, повреждены, цвет становится красным . Это быстрый, простой и дешевый метод.

 6.  Окрашивание спермы анилиновым синим; Анилиновый синий - кислотный краситель, используемый для оценки целостности сперматозоидов хроматина Сперматозоиды с поврежденной ДНК окрашиваются в темно-синий цвет из-за плохой упаковки хроматина, в то время как нормальные сперматозоиды не окрашиваются, поскольку их клеточная структура не повреждена .

 7. окрашивание спермы толуидиновым синим; Анилин представляет собой приложение, похожее на синий метод. Плохо упакованная или поврежденная ДНК спермы легко окрашивается. В то время как поврежденная сперма окрашивается в синий цвет, неповрежденная нормальная сперма контролируется бесцветной .

Анилиновый синий и TUNEL тесты используются в оценке повреждения ДНК спермы в клинике Acibadem .

 

Оценка проводится в сперматозоидах в сперме, взятой обычным способом. После того, как препарат произведен в соответствии с применяемым методом, подсчет сперматозоидов рассчитывается с помощью метода оценки и рассчитывается коэффициент поврежденных сперматозоидов. После оценки оценка делится на три группы: обычные, менее поврежденные и рискованные:

 

Если повреждение ДНК составляет менее 15%, существует достаточное количество здоровых сперматозоидов, а уровень оплодотворения высок

Если повреждение ДНК составляет от 15 до 30%, то допустимо повреждение ДНК; однако оплодотворение возможно

Если повреждение ДНК составляет более 30%, уровень повреждения ДНК повышается, а вероятность оплодотворения низкая.

В случаях высокого повреждения ДНК спермы в качестве лабораторного метода используются такие подходы, как передовые методы отбора сперматозоидов или вспомогательные репродуктивные методы, а также использование сперматозоидов яичка. В то время как исследования, проведенные, 4% повреждения ДНК в сперматозоидах, полученных из яичка, 8% сперматозоидов, попавших в область головки придатка яичка, еще не покинули яичко; Эпидидимия показывает, что она может достигать 12% в сперматозоидах, которые достигли средней области. Таким образом, у этих пациентов сперма может быть получена из яичка и использована вспомогательными репродуктивными методами путем введения тонкой иглой под местной анестезией с помощью метода, называемого TESA (аспирация сперматозоидов из яичка).

Способы получения сперматозоидов из яичек

 

Микродиссекция экстракции сперматозоидов из яичка (Micro TESE)

Метод MikroTESE - это метод, который требует микрохирургии. Предыдущий опыт хирурга в этом отношении увеличит успех процедуры.

Используя преимущество 30-кратного увеличения микроскопа, под хирургическим микроскопом выращивают тонкие трубки, называемые тубулусом, где вырабатывается сперма, и выделяют большие непрозрачные беловатые канальцы, которые содержат больше сперматогенно активных половых клеток. Эти канальцы, которые могут содержать сперму, взяты урологом. Этот трубочка расщепляется эмбриологом, сперма в канальце удаляется, и сперма ищется под микроскопом с большим увеличением (200-400-кратное увеличение). Если взятый канальец содержит сперму, он готов к получению спермы. Подготовленную сперму собирают в микроскоп под микроскопом для нанесения ИКСИ.

 

 

Отличие метода MikroTESE от TESE:

Выполнение процедуры под микроскопом увеличивает вероятность обнаружения спермы с 30 до 52 процентов.
Яичко также является областью, которая производит гормон тестостерон. По этой причине этот метод сводит к минимуму потерю ткани, уменьшая количество ткани, взятой из яичка. Потеря тканей пациента при этом методе в 70 раз меньше, чем при методе множественной биопсии.
Так как это сделано под микроскопом, это обеспечивает разрез, не повреждая сосуды, питающие яичко.
При отсутствии сперматозоидов в сперме по генетическим причинам, таким как синдром Клайнфелтера, вероятность обнаружения сперматозоидов с помощью этого метода увеличивается до 50 процентов.
По сравнению со старым методом нахождения спермы, скорость нахождения сперматозоидов на 50 процентов выше.
 

Благодаря этим преимуществам процесс микро TESE применяется в Acibadem вместо мультифокального TESE.

TESA (TESA - аспирация сперматозоидов из яичка)

Это процесс поиска сперматозоидов путем ввода яичка из многих точек под регионарной или общей анестезией путем аспирации ткани яичка. Это делается в тех случаях, когда сперма не может выйти из-за обструкции в каналах сперматозоидов, можно применить TESA и получить успешные результаты.

 

 

КРИОПРЕЗЕРВИРОВАНИЕ СПЕРМЫ

 

Сперматозоиды можно хранить путем замораживания, чтобы сохранить их жизнеспособность в течение длительного времени, и при желании их можно разморозить и использовать в вспомогательных репродуктивных методах. Первый здоровый ребенок с замороженной спермой родился в 1973 году. В процессе замораживания используются растворы, называемые криопротекторами, специально изготовленными для этого процесса. Наиболее важной проблемой, возникающей при замораживании живых клеток, является то, что вода в клетке замерзает и образует кристаллы льда и повреждает клеточную структуру этих кристаллов. Чтобы предотвратить это, во время процесса замораживания вода в сперме извлекается во внешнюю среду, а криопротектор попадает в клетку. Замороженные спермы хранятся в резервуарах с жидким азотом (-196 ̊C). Во время оттаивания замороженной спермы криопротектор выводится из клетки, а вода возвращается обратно в клетку. Можно наблюдать снижение подвижности и жизнеспособности после оттаивания замороженной спермы. Наиболее важной причиной этого является то, что не все сперматозоиды в замороженном образце одинаково устойчивы к стрессу этого процесса. Кроме того, некоторые из сперматозоидов подвергаются физическому повреждению во время процедуры. Научные исследования, проведенные до настоящего времени, показывают, что на показатели оплодотворения и беременности не влияет отрицательно после микроинъекции замороженной оттаявшей подвижной сперматозоидом. Если количество полученных сперматозоидов недостаточно для замораживания и хранения, пациенту можно сделать повторную биопсию. В процессе микроинъекции жизнеспособность сперматозоидов оценивается путем определения, подвижны они или нет. Неактивные спермы не являются предпочтительными, если есть подвижные сперматозоиды. Поскольку методы, применяемые для получения сперматозоидов в этих случаях, налагают на пациента физиологическое, психологическое и материальное бремя, оставшуюся сперматозоид после микроинъекции следует заморозить, чтобы использовать в других возможных процедурах. Однако, если количество сперматозоидов, полученных из яичка, очень мало, вероятность обнаружения живых сперматозоидов при их растворении очень мала.